ABSTRACT
Anticorpos monoclonais (AcM) para rotavírus bovino foram caracterizados para sua aplicação como ferramenta de diagnóstico, utilizando-se as técnicas de isotipificação, dot-blot, western-blot, imunofluorescência indireta (IFI) e ELISA de captura. A caracterização imunoquímica demonstrou que os cinco AcM 1G5, 4F7, 1E12, 4F3 e 3C12 foram do isótipo IgG2a. Pela técnica de dot-blot, os AcM 1G5, 4F7, 1E12, 4F3 detectaram antígenos do rotavírus, em diferentes concentrações, e dois AcM (1E12 e 4F3) reconheceram proteínas virais pela técnica de western-blot. Todos os AcM reagiram positivamente na técnica de IFI em cultivo celular e foram capazes de detectar antígeno viral em amostras fecais bovinas e humanas, pela técnica de ELISA de captura. Identificaram-se dois grupos de AcM, um deles formado pelos AcM 4F7, 1E12 e 1G5, para seu possível uso na detecção de antígeno viral em fezes por meio do ELISA de captura ou dot-blot e outro pelos 4F3 e 3C12, que podem ser usados para detectar antígeno viral em culturas de células por meio de IFI.
This work was carried out to characterize and evaluate five bovine rotavirus, monoclonal antibodies (MAbs), as a diagnosis tool, by isotyping, dot-blot, western-blot, indirect immunofluorescence (IFI) and ELISA techniques. The immunochemistry characterization showed that all five MAbs (4F7, 4F3, 1G5, 1E12 and 3C12) were IgG2a isotype. The dot-blot immunoassay showed that 1G5, 4F7, 1E12 and 4F3 detected viral antigen in different concentrations and two MAbs (1E12 and 4F3) recognized viral proteins by western-blot. All MAbs detected viral antigen in bovine and human fecal samples by capture ELISA technique and viral antigen in infected MA-104 cell culture by IFI. In conclusion, two groups of Mabs were indetified: one with Mabs 4F7, 1E12 and 1G5 showed the best results to detect rotavirus antigen in fecal samples by capture ELISA or dot-blot techniques assay and other with 4F3 and 3C12 which may be used to detect rotavirus antigens in cell culture by IFI. The results showed the potential use of these MAbs as diagnosis tools in diarrheas by rotavirus in bovines.
Subject(s)
Animals , Cattle , Antibodies, Monoclonal , Antigens, Viral/isolation & purification , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay , Immunoblotting/veterinary , Rotavirus/immunology , Rotavirus/isolation & purification , Blotting, Western/methods , Cattle/immunologyABSTRACT
La seroneutralización (SN) en cultivos celulares, hemoaglutinación pasiva (HA), la inmunofluorescencia indirecta (IFI) y las pruebas inmunoenzimáticas (ELISA) son de utilizadas para la detección de anticuerpos específicos contra Herpesvirus-bovino 1 (BHV-1). La prueba de SN es la determinación de referencia, sin embargo las dificuldades de implementación por la necessidad de contar con cultivos celulares, así como la celeridad en la obtención de resultados, determinan la optimización de otra prueba de alternativa y equivalente especificidad y sensibilidad. Trabajos previous describen una alta correlación entre las técnicas de SN vs IFI y de SN vs ELISA, destacando una mayor sensibilidad para el ELISA. El presente trabajo compara la sensibilidad y especificidad de IFI, ELISA y SN en la detección de anticuerpos a BHV-1 utilizando 105 sueros bovinos. La especificidad de las técnicas comparadas se demostró por la seroconversión obtenida en sueros de animales experimentalmente infectados (Cuadro 1). Se observó una alta asociación entre sueros reactivos y no reactivos entre SN e IFI, SN y ELISA y entre Ifi y ELISA destacándose una mayor sensibilidad para el ELISA (Figuras 2 y 3). El estudio estadístico de los resultados obtenidos con las tres técnicas diagnósticas determinó un alto coeficiente de correlación entre las mismas (Cuadro 2). Debido a la simplicidad y facilidad de ejecución se recomienda la técnica de ELISA para estudios epizootiológicos de larga escala
Subject(s)
Animals , Cattle , Herpesvirus 1, Bovine/isolation & purification , Infectious Bovine Rhinotracheitis/diagnosis , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay , Species Specificity , Fluorescent Antibody Technique , Herpesvirus 1, Bovine/immunology , Neutralization TestsABSTRACT
Se elaboró una vacuna inactivada con la cepa LQ-514 del virus Parainfluenza-3 aislado en brotes de neumonía en terneros de 30 a 60 días de edad y cepas de Pasteurella hemolítica y P. multocida. En este trabajo se estudió la posibilidad de evaluar dicha vacuna con adyuvante oleoso en cobayos de 1 a 2 meses de edad, a través de la respuesta de anticuerpos y aislamiento de virus luego de la descarga. En los animales vacunados pudieron detectarse anticuerpos inhibidores de la hemoaglutinación a partir del día 14 p.i. llegando a títulos máximos el día 28 p.i. A los tres días de la descarga se evidenció una respuesta de tipo secundario en los animales vacunados, alcanzando el máximo al cuarto día. El virus pudo aislarse en cultivos celulares a partir de pulmón de animales no inmunizados los días 3,4 y 5 post descarga, evidenciándose además su presencia por inmunofluorescencia directa y por microscopía electrónica. Por el contrario, en los animales vacunados y descargados no pudo aislarse virus de pulmón ni ponerse en evidencia por inmunofluorescencia directa o microscopía electrónica